Técnica de PCR para Hepatitis B
La hepatitis B es una enfermedad que afecta al hígado, causada por el virus de la hepatitis B (VHB), que se transmite a través de sangre, fluidos corporales como semen y líquidos vaginales, o de la madre al bebé durante el parto. Para detectar y analizar este virus, se utiliza la técnica de PCR, que permite identificar el ADN del VHB, medir su cantidad en el organismo y detectar posibles mutaciones a partir de una muestra de sangre del paciente. Esta técnica evalúa principalmente los genes S (de superficie) y C (Core), que confirman la presencia del virus, además de analizar el gen P (Polimerasa) y, en algunos casos, el gen X.
Tipo de muestra biológica: Suero, plasma, sangre
y fluido oral.
Tipo de ácido nucleico: ADN viral
Extracción (lisis,
separación, purificación):
- Lisis: Aplicación de agentes químicos como detergentes o
proteinasas, o métodos físicos como calor o ultrasonido para romper las
membranas celulares y liberar el ADN.
- Separación: Utilización de la centrifugación para remover los
detritos celulares y otras macromoléculas.
- Purificación: Precipitación del ADN viral utilizando alcoholes
como etanol o isopropanol para eliminar impurezas.
Tipo de PCR: A tiempo real (RT-PCR), entre 30 y 40 ciclos, dependiendo del equipo.
Genes amplificados- Gen S (Superficie)
- Gen C (Core)
- Gen P (Polimerasa)
- Gen X
Pasos de
amplificación:
- Desnaturalización: 94°C por 20 segundos - Separar las hebras
de ADN.
- Hibridación: 50°C por 20 segundos - Primeros se unan a las
secuencias diana del ADN.
- Elongación: 72°C durante 30 segundos para que la ADN polimerasa
extienda las hebras a partir de los primeros.
La técnica de PCR en tiempo real (RT-PCR) descrita
para la detección del virus de la hepatitis B (VHB) proporciona resultados
cuantitativos. Esto se debe a que este método permite medir la cantidad de
ADN viral presente en la muestra mediante el uso de curvas estándar y valores
de fluorescencia en tiempo real, lo que facilita la determinación de la carga
viral.
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